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DIAGNÓSTICO DE LAS ITS. INFECCIONES VIRALES


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1 DIAGNÓSTICO DE LAS ITS. INFECCIONES VIRALES Virus Herpes Simple Prof. Adj. Pablo López. Departamento de Laboratorio de Patología Clínica. Inmunología y Biología Molecular. Hospital de Clínicas.

2 Herpes Simplex tipo I y II

3 Importancia 400 millones de personas infectadas en el mundo Cada año se infectan unas 20 millones de personas. La infección aumenta con la edad, aunque el mayor número de infecciones se produce en adolescentes. La infección genital por el VHS es causada principalmente por el VHS-2.

4 Transmisión La principal vía de transmisión es la vía sexual. Se transmite por contacto con las superficies genitales, la piel, las vesículas o exudados de pacientes infectados/as. Lo pueden transmitir personas asintomáticas, ya que se ha demostrado frecuente eliminación viral mediante shedding asintomático.

5 Transmisión Vertical Embarazadas con herpes genital en actividad pueden transmitir el VHS-2 o el VHS-1 al RN durante el parto. El herpes neonatal es una complicación grave con elevada mortalidad (60% si no es tratada).

6 Paciente HIV Asociación VHS tipo II del 60-90% con HIV Presentación más grave y recurrencias más frecuentes Aumenta el riesgo de transmisión de HIV

7 Clínica Caracterizadas por ÚLCERAS GENITALES Vesículas o úlceras dolorosas genitales o anales. La infección genital por el VHS suele ser ASINTOMÁTICA o síntomas leves. Uretritis con disuria. Balanitis, cervicitis, vulvovaginitis. Primoinfección síntomas generales: fiebre, malestar general, mialgias y adenopatías.

8 A tener en cuenta Diagnóstico Virus ADN de doble cadena. Posibilidad de un estadio de latencia que les permite eludir la respuesta inmune del hospedero. Primoinfección días Virus persiste en forma latente en los ganglios nerviosos sensitivos Posibles las reactivaciones

9 Diagnóstico Pruebas Indirectas - Serológicas Ac. Comunes Ac. Específicos de tipo Glicoproteína G1 (VHS-1) Glicoproteína G2 (VHS-2) Características Los Ac se adquieren en primeras semanas y luego persisten. Buena Sensibilidad Falsos Negativos en primera etapa post-infección Inmunoblot y ELISA 98% VPN

10 Utilidad de pruebas serológicas 1. Síntomas genitales recurrentes o atípicos con PCR or cultivo negativo 2. Diagnóstico clínico de herpes genital sin confirmación de laboratorio 3. Pacientes con compañero/a portador de herpes genital.

11 Diagnóstico Pruebas Directas Cultivo Viral Baja sensibilidad Muy Específicas Alta complejidad Técnicas Moleculares Buena Sensibilidad Buena Especificidad Requiere equipamientos específico Inmunofluorescencia Directa Baja sensibilidad Laboriosas Personal entrenado

12 Técnicas de Acidos Nucleicos (NATs) Extracción de AN Amplificación PCR Real Time PCR Revelado

13 Diagnóstico Molecular Muestra Hisopos en medios de transporte Lavado cervicovaginal Sangre periférica Métodos de extracción de ADN Manual Automatizado Sin extracción

14 Real-Time PCR for detection of herpes simplex virus without nucleic acid extraction Mark W Pandori*, John Lei, Ernest H Wong, Jeffrey Klausner and Sally Liska BMC Infectious Diseases 2006

15 Pruebas de Biología Molecular PCR para VHS PCR Cualitativa o Punto final Target Molecular Ventajas: Sensibilidad Desventajas: Contaminación Amplicones

16 Diagnóstico Molecular Amplificación de DNA PCR Cuantitativo (qpcr) Tipos de Sondas Plataformas Rotor-gene, Applied, Lightcylcer. Secuencia Target Gen DNA polimerasa, tirosin-quinasa, Glicoproteína B Molecular Beacons

17 Diagnosis of genital herpes by real time PCR in routine clinical practice. M Ramaswamy, C McDonald, M Smith, D Thomas, S Maxwell, M Tenant-Flowers,. Sex Transm Infect 2004;80: London.

18 Diagnóstico Molecular Amplificación de DNA- Cuantificación Punto de corte (Cutt-off)

19 Genotipificación Secuenciación Análisis de Polimorfismos de Longitud de Fragmentos de Restricción (RFLPs) Primers específicos de tipo (PCR) High Resolution Melting (HRM) Diferenciación HVS tipo 1 y 2.

20 High Resolution Melting Melting Amplificación

21 Tipificación por sondas específicas 1 sonda específica para VHS-1 1 sonda específica para VHS-2 1 sonda específica para Control Interno Semicuantitativos y cuantitativos

22 Valor de la Viremia Frecuencia: 24% herpes genital primario. 20% reactivación de herpes. Enfermedad sistémica severa es rara. Causas Sobreestimación de carga viral Mayoría del virus no productivo Características del huésped Características del virus, tropismo y factores de virulencia

23 Diagnóstico Molecular Ventajas Alta sensibilidad Alta especificidad Rapidez Desventajas Alto costo? Heterogeneidad Dificultades en la Estandarización

24 MUCHAS GRACIAS Dr. Pablo López

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